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浙江检验学备考资料:酶联免疫吸附试验测抗原

来源:中公浙江卫生人才网 时间:2020-07-24 09:44:02

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酶联免疫吸附试验又叫ELISA,是将抗原或抗体预先结合到某种固相载体表面,测定时,将待测样品(含待测抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体反应形成抗原抗体复合物。反应终止时,固相载体上酶标抗原或抗体被结合量与待测标本中待检抗体和抗原的量呈一定比例,经洗涤去除反应液中其他物质,加入底物进行显色,最后通过定性和定量分析有色产物量即可确定样品中待测物质含量的方法。

ELISA的应用非常广泛,可以检测抗原,也可以检测抗体。小编在这帮大家回顾总结一下ELISA检测抗原常用的双抗体夹心法和双位点一步法,来帮助大家记忆区分:

方法

操作步骤:

备注

双抗体夹心法

将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体。加入受检标本,让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合,形成固相免疫复合物。再加酶标抗体,使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。最后加入底物,夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物,通过分析有色产物量即可确定样品中待测抗原含量。

(1)检测抗原最常用的方法;

(2)适用于检测含有两个或两个以上抗原决定簇的多价抗原。

双位点一步法

应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体,在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步,是简洁版的双抗体夹心法;

将含待测抗原标本和酶标抗体同时加入进行反应,两种抗体互不干扰,经过一次温育和洗涤后,即可加入底物进行显色测定。

 

(1)操作简单、节省时间,但易出现抗原过量导致的“钩状效应”;

(2)适用于检测含有两个及两个以上,且空间距离较远的抗原决定簇;

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